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      叶绿素荧光助力发现蒽醌衍生物赋予植物光胁迫耐受性
      日期:2025-02-28 16:45:52

      2025年2月27日,Communications Biology在线发表日本东京大学农业与生命科学研究生院Wataru Yamori课题组标题为Identification and characterization of compounds that improve plant photosynthesis and growth under light stress conditions的研究论文。文章通过叶绿素荧光成像系统构建了基于烟草叶圆片的高通量化学筛选系统,发现并验证了蒽醌衍生物(如A1N和A4N)能够通过增强光系统I(PSI)的电子接受能力缓解植物高光胁迫,显著提升光合效率和作物生长,且对非胁迫条件下的植物无负面影响,为农业抗逆化学品的开发提供了新策略。

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      研究背景
      全球人口预计到2050年将达100亿,但当前约10%的人口面临粮食短缺。气候变化引发的极端天气(如高温、强光)导致约91%的农田遭受环境胁迫,造成作物减产。其中,光合作用能力的下降是作物减产的主要原因。植物在强光条件下,光系统II(PSII)和光系统I(PSI)的电子传递链易发生过载,导致活性氧(ROS)积累和光合机构损伤。PSI的过度还原(如P700的快速电荷重组)会进一步加剧光抑制,降低光合效率和作物产量。

      现有抗逆策略或多或少的都存在局限性。例如基因改造,通过引入玉米GOLDEN2-LIKE基因或苔藓的Flavodiiron蛋白可增强光胁迫抗性,但公众对转基因作物的安全性担忧限制了其应用。化学生物学方法也可以提高作物抗性,已有研究通过小分子化合物调控植物气孔开闭或代谢通路(如乙酸诱导抗旱性),但针对光胁迫的化学保护剂研究几乎空白。亟需开发一种非转基因的化学保护剂,通过改善光合电子传递效率缓解高光胁迫,同时不影响正常生长条件下的植物表现。

      技术路线
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      首先是高通量化学筛选系统的构建,以烟草(Nicotiana tabacum)叶圆片为研究对象,该样品具有均匀的光合活性,适合大规模筛选。设计两轮筛选流程:第一轮使用标准96孔板对12,000种化合物进行初步筛选,以叶圆片光合参数(Fv/Fm、Y(II))为指标;第二轮对初筛阳性化合物进行3次以上重复验证,排除含毒性基团(如-NO₂、-C≡N)的化合物。最终,筛选出33种候选化合物,最终选定两种安全且高效的蒽醌衍生物A1N和A4N,并进一步研究其10种结构类似物(A14N、A48N、A1N4C、A1N、A1458N、A1Ch、A14Ch、A14Ch23C、A1Ch2C、A4Ch1C)。
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      第二步是基于光合参数进行实验验证。在筛选系统的基础上进行叶圆片实验,通过700 μmolm⁻²·s⁻¹强光处理12小时诱导光胁迫,A1N和A4N处理组的光合诱导速率(Y(II))显著高于对照组(图2)。然后进行浓度依赖性评估,低浓度(0.08–2 μg·mL⁻¹)下,蒽醌衍生物显著提升光合效率;高浓度(4 μg·mL⁻¹)可能抑制PSII功能。

      除了叶圆片实验,本研究也进行了蒽醌衍生物对完整叶片的实验验证,使用四种植物(烟草、生菜、番茄和拟南芥)进行,A1N处理组在72小时光胁迫后,PSII和PSI的电子传递速率(ETR II/ETR I)及CO₂同化率显著高于对照组(图5)。PSI氧化能力测量实验证实A1N和A4N可作为PSI的电子受体,通过氧化PSI受体侧(如A0/A1)减少过度还原。

      图2-525022802.jpg

      第三步是蒽醌衍生物光胁迫抗性化学保护剂的分子机制与基因表达分析。电子传递链定位,蒽醌衍生物在PSI的电子接受能力为MV(甲基紫精)的78-86%,但在PSII中无活性(图4C)。其还原电位(A1N: -816 mV vs. SHE)低于PSI的P700(-1320 mV),但高于PSII的P680(-620 mV),表明其特异性作用于PSI。RNA测序相关的转录组分析显示,A1N处理组拟南芥在光胁迫下光合相关基因(如光捕获复合体、电子传递链基因)的表达下调较少,表明其通过保护光合机构减少基因调控压力。

      最后,本研究对蒽醌衍生物作为光胁迫抗性化学保护剂的长期效应与安全性进行了评估。通过恢复实验研究发现,光胁迫处理96小时后,A1N处理组的拟南芥、生菜和番茄在恢复期(1周)表现出更高的叶绿素含量(SPAD值)和生物量,且未出现早期开花等胁迫症状(图6-8)。安全性方面,非胁迫条件下,A1N处理组的光合参数和生长指标与对照组无差异。表面施用的蒽醌衍生物在7天内完全降解,无环境残留风险。

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      研究意义
      首先,植物光胁迫抗性化学保护剂在农业应用中有巨大潜力,本研究提供了一种非转基因的解决方案,通过叶面喷施蒽醌衍生物(如A1N)增强作物在极端光照条件下的抗逆性,适用于蔬菜、水果、花卉等高附加值作物。在光胁迫下提升光合效率达30-40%,显著减少产量损失。

      其次,本研究首次揭示蒽醌衍生物通过调节PSI氧化还原状态缓解光胁迫的分子机制,填补了化学生物学在光胁迫领域的研究空白。建立的高通量叶圆片筛选系统和技术路线为未来植物抗逆化学品剂的开发提供了高效平台。

      最后,也是最重要的一点是蒽醌衍生物的环境与安全性优势,它们天然存在于地衣、植物中,具有低毒性和快速降解特性,符合可持续农业需求。避免了基因改造作物的监管和公众接受度问题。

      重点关注
      本研究中,基于烟草叶圆片构建的的高通量化学筛选系统是以叶绿素荧光成像系统MAXI-IMAGING-PAM为底盘的,5.35 mm的烟草叶圆片放置在96孔板进行筛选。96孔板孔内提前放置棉球并加200μL蒸馏水以营造潮湿的环境。将叶圆片放在棉球上,叶子的顶部朝上。在整个过程中,它们保持湿润。番茄和生菜完整叶片以及拟南芥植株的光合参数测量,蒽醌衍生物长期效应与安全性评估也都是通过MAXI-IMAGING-PAM叶绿素荧光成像系统完成的。
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      此外,实验样品PSII和PSI期间电子传输速率的测定还用到了双通道叶绿素荧光仪DUAL-PAM-100和GFS-3000光合仪及联用叶室。系统全面的评估了蒽醌衍生物对烟草、番茄、生菜和拟南芥幼苗的短期和长期的影响。

      DUAL-PAM-100 and GFS-3000.jpg
      原文
      Qu, Y., Sakoda, K., Wakabayashi, Y., et al. Identification and characterization of compounds that improve plant photosynthesis and growth under light stress conditions[J]Communications Biology, 2025, 8: 300.
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